Валидация теста «приподнятый крестообразный лабиринт»

  • Всеволод Вячеславович Павшинцев Испытательный центр «Виварно-экспериментальный комплекс ООО «НИИ Митоинженерии МГУ»», Москва
  • Максим Львович Ловать Испытательный центр «Виварно-экспериментальный комплекс ООО «НИИ Митоинженерии МГУ»», Москва
  • М. В. Белопольская Испытательный центр «Виварно-экспериментальный комплекс ООО «НИИ Митоинженерии МГУ»», Москва
  • О. Н. Воронцова ООО «НПК Открытая наука», Красногорск, Россия

Аннотация

Установка "Приподнятый крестообразный лабиринт" (ПКЛ) – классический тест для оценки уровня тревожности животного, а также симптомов неврологического дефицита [1]. При этом для получения воспроизводимых результатов и для их последующей адекватной трактовки данный тест требует валидации и стандартизации. В качестве тестового препарата целесообразно использовать препараты с известным механизмом действия и спектром поведенческих проявления, такие как бензодиазепиновые транквилизаторы (в неседативных дозах). В частности, диазепам вызывает снижение уровня тревожности мышей и крыс, выражающееся в повышении времени нахождения на открытых лучах установки [2]Цель работы: Разработка метода валидации теста «Приподнятый крестооб-разный лабиринт»Методы: Установка «ПКЛ» для мышей (производство «НПК Открытая Наука», Россия) представляет собой лабиринт из 2х перпендикулярных лучей длиной 30 см., шириной 5 см. приподнятый на 30 см. от пола. Два луча – «закрытые» - т.е. имеют стенки и торец высотой 15 см. По бокам открытых лучей на высоте 70 см. имеются источники яркого света (освещенность закрытых рукавов 700 лк, открытых – 50 лк), светящие горизонтально. 20 мышей линии Balb/c SPF категории были разделены на 2 подгруппы: «интактный контроль» (n=10) – в/б введение физ. р-ра., «диазепам» (n=10) – в/б введение препарата диазепам в дозе 0,5 мг/кг за 1 час до тестирования. Эксперимент проводился согласно стандартному протоколу [3], перед началом тестирования животные содержались в домашних клетках, в комнате, смежной с экспериментальной в течение 1 часа. Первым в установку помещалось «нулевое» животное на 5 минут для нанесения запаховых меток. Между животными установка протиралась спиртовым раствором антисептика «АХД-2000» для маскировки и распределения запахов по рукавам лабиринта. После опыта каждая мышь отсаживалась в другую клетку. Анализ видеозаписей осуществлялся программой «Noldus Ethovision XT 8.5». Статистическая обработка проводилась при помощи непараметрического критерия Манна-Уитни.Результаты: В интактной группе показатель средней скорости составил 3,0±0,32 см/с, а общая пройденная дистанция – 898,8±95,23 см., количество стоек – 5,4±1,8, введение препарата «диазепам» привело к увеличению данных значений 4,1±0,18 см/с и 1220,7±54,56 см, 11,9±2 соответственно (p<0,05). Время на открытых лучах у группы «диазепам» было значимо больше относительно интактной группы (72,9±12,7 с. и 33,2±5,67 с., p<0,05), что позволяет судить о снижении тревожности животных и, таким образом, о валидности данных условий.Выводы: Использование установки «ПКЛ» данных размеров, цвета, и при данных условиях эксперимента (освещенности, метод посадки и регистрации), пригодно тестирования анксиолитических свойств препаратов.

Литература

1. Sestakova N., Puzserova A., Kluknavsky M, Bernatova I. Determination of motor activity and anxiety-related behaviour in rodents: methodological aspects and role of nitric oxide. Interdisciplinary Toxicology; 6(3): 126–135 (2013)
2. Lepicard EM, Joubert C, Hagneau I, Perez-Diaz F, Chapouthier G. Differences in anxiety-related behavior and response to diazepam in BALB/cByJ and C57BL/6J strains of mice. Pharmacol Biochem Behav.; 67(4):739-48 (2000)
3. Walf A., Frye C. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nature Protocols 2, 322-328 (2007)
Опубликован
2017-11-29
Раздел
Материалы конференций