Получение химерных мышей путем инъекции эмбриональных стволовых клеток в бластоцисту на базе центра генетических ресурсов лабораторных животных ИЦиГ СО РАН

  • Галина Владимировна Концевая ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • Н. А. Феофанова ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • А. Г. Мензоров ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • И. Е. Пристяжнюк ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • А. В. Смирнов ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • Н. Р. Баттулин ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия
  • Л. А. Герлинская ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Россий-ской академии наук, Новосибирск, Россия

Аннотация

Несмотря на все более широкое применение метода микроинъекции систем редактирования генома в зиготу, получение трансгенных мышей с помощью инъекции эмбриональных стволовых (ЭС) клеток в бластоцисту мыши все еще остается крайне востребовано при внесении сложных модификаций в геном. Помимо линий модифицированных ЭС клеток для получения химерных мышей необходимо технологическое обеспечение для проведения инъекций ЭС клеток в бластоцисты, пересадку бластоцист реципиентным самкам и другие вспомогательные операции. В связи с этим на базе Центра генетических ресурсов лабораторных животных ИЦиГ СО РАН была создана технологическая база, позволяющая реализовать методику получения трансгенных линий мышей.Цель работы: отработка технологии получения химерных мышей с вкладом эмбриональных стволовых клеток в формирование гамет путем инъекции эмбриональных стволовых клеток в бластоцисту мыши на базе Центра генетических ресурсов лабораторных животных ИЦиГ СО РАН.Методы: для проведения эксперимента по созданию химерных мышей мы использовали линию стволовых клеток DGES1 (нормальный кариотип 2n = 40, XY, генотип 129S2/SvPasCrl), созданную в лаборатории генетики развития ИЦиГ СО РАН. Для микроинъекции в бластоцисты использовали клетки на 34-м пассаже. Бластоцисты получали от суперовулированных самок B6D2F1, покрытых самцами C57BL/6J, через 3 дня после обнаружения пробки. Клетки ресуспендировали и вводили по 12-15 шт в бластоцель с помощью инвертированного микроскопа Axio Observer (Carl Zeiss, Германия), оснащенного системой микроманипуляторов и микроинъекторов (Narishige, Япония) и охлаждающим столиком (+6 °C), соединенным с водяной помпой. После проведения микроинъекций бластоцисты трансплантировали в матку псевдобеременных самок CD-1 (2,5 дня беременности). Все животные, использованные в эксперименте, были SPF-статуса. Результаты: в ходе эксперимента ЭС клетки были введены в 136 бластоцист генотипа B6D2F1. Бластоцисты были подсажены 10 псевдобеременным самкам CD-1, у которых суммарно родилось 66 мышат. Среди этих потомков 15 оказались химерами, 4 из них с химеризмом выше 80 %. Все родившиеся химеры фенотипически были самцами и не имели отклонений в развитии. 10 из 15 химерных животных были фертильны. Анализ аллелей микросателлитов потомков химерных самцов показал вклад эмбриональных стволовых клеток DGES1 в формирование гамет.Выводы: имеющаяся технологическая база, а также использование линии ЭС клеток DGES1 в сочетании со специфическими генотипами реципиентных бластоцист и приемных матерей привело к эффективному получению фертильных химерных мышей.  
Опубликован
2017-09-20
Раздел
Материалы конференций